丁型肝炎IgM抗体-HDV-IgMELISA试剂盒说明

这个仪表是何含义:丁型肝炎IgM抗体-HDV-IgMELISA试剂盒说明

2020-03-12 22:02:33热度:作者:东弘仪器仪表来源:http://www.phunxammoi3d.com

丁型肝炎IgM抗体-HDV-IgMELISA试剂盒说明 日期:2020年03月08日06:17来源:T云

双抗体夹心法(sandwichELISA):双抗体夹心法(sandwichELISA)检测是被检测的抗原包被在两个抗体之间,其中一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量;或不标记,再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取,才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。优势:高灵敏、高专一性,抗原无须事先纯化;缺点:抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。丁型肝炎IgM抗体-HDV-IgMELISA试剂盒说明

样本处理

ELISA待测样本比如血清建议宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。

检测步骤

ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。胸苷激酶1-TK1ELISA试剂盒操作方法

ELISA基本原理

①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最终结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:

①固相的抗原或抗体

②酶标记的抗原或抗体

③酶作用的底物(显色剂)。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。

竞争法(competitiveELISA):样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体,当样品里的自由抗原越多,就可以结合越多的抗体,而固定抗原就只能结合到较少的抗体,反之亦然。经清洗步骤,洗去自由抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较,根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。优势:可适用比较不纯的样本,而且数据再现性很高。缺点:整体的敏感性和专一性都较差。

ELISA新技术——基于细胞法(cell-basedELISA):ELISA新技术——基于细胞法(cell-basedELISA)是一种新型的定性蛋白检测技术,是将细胞直接放在微孔板里培养,待检测时,不需要抽提蛋白和裂解细胞,便可以直接测量微孔板里蛋白经刺激或阻抑作用后的变化差异。优势:更方便,无需裂解细胞,所以目标蛋白损失最少,可测定完整细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞;缺点:不能测定抗原量。

1971年瑞典学者Engvall和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,即酶联免疫吸附测定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题,它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或其他小分子的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序,通常是把蛋白、抗体、或小分子等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(captureAb)固定在固相载体上,再加入一级检测抗体(primarydetectionAb),形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶(enzyme)标记了,即可用来直接测定抗原的量,若无,则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质(substrate),作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系,依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。丁型肝炎IgM抗体-HDV-IgMELISA试剂盒说明

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注意事项2

⑶ 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

⑷ 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致*作用,应注意防护。有条件者应使用不致*、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是当前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。丁型肝炎IgM抗体-HDV-IgMELISA试剂盒说明

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